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電泳方法簡介

電泳技術(shù)發(fā)展迅速,方法種類繁多,以下簡單介紹幾種電泳方法。
4.3.1 紙電泳
紙電泳(PE)是指用濾紙作為支持載體的電泳方法。是**早使用的區(qū)帶電泳,由于操作簡單方便,因此在很多領(lǐng)域得以廣泛應(yīng)用。比如,分離、確定某些蛋白質(zhì),如糖蛋白、脂蛋白等,尤其是在分離氨基酸的混合物時,PE 是一種很有價值的分析技術(shù)。在這種平臥式濾紙電泳裝置(見圖6-2)中,將濾紙條水平地架設(shè)在兩個裝有緩沖溶液的容器之間,樣品點(diǎn)于濾紙中央。當(dāng)濾紙條被緩沖液潤濕后,再蓋上絕緣密封罩,即可由電泳電源輸入直流電壓(100V~1000V)進(jìn)行電泳。
4.3.2 乙酸纖維素薄膜電泳
乙酸纖維素是提纖維素的羥基乙?;纬傻睦w維素乙酸酯。由該物質(zhì)制成的薄膜稱為乙酸纖維素薄膜。電泳時經(jīng)過膜的預(yù)處理、加樣、電泳、染色、脫色與透明即可得到滿意的分離效果。此電泳特點(diǎn)是分離速度快、電泳時間短、樣品用量少。因此特別適合于病理情況下微量異常蛋白的檢測。
4.3.3 凝膠電泳
由區(qū)帶電泳中派生出一種用凝膠物質(zhì)作支持物進(jìn)行電泳的方式,被稱為凝膠電泳。因此,該凝膠適合于免疫復(fù)合物、核酸與核蛋白的分離、鑒定及純化。在臨床生化檢驗(yàn)中常用于LDH、CK 等同工酶的檢測。
4.3.4 等電聚焦電泳
等電聚焦電泳是20 世紀(jì)60 年代中期問世的,一種利用有pH 值梯度的介質(zhì),分離等電點(diǎn)不同的蛋白質(zhì)的電泳技術(shù)。因?yàn)檫@種電泳方法具有很高的分辨率,所以在等電點(diǎn)上只要有0.01pH 單位的差異就能被滿意地分離。因此,特別適合于分離分子量相近而等電點(diǎn)不同的蛋白質(zhì)組分。
等電聚焦電泳法的特點(diǎn)①使用兩性載體電解質(zhì),在電極之間形成穩(wěn)定、連續(xù)、線性的pH 梯度;②由于“聚焦效應(yīng)”,即使很小的樣品也能獲得清晰、鮮明的區(qū)帶界面;③電泳速度快;④分辨率高;⑤加入樣品的位置可任意選擇;⑥可用于測定蛋白質(zhì)類物質(zhì)的等電點(diǎn);⑦適用于中、大分子量(如蛋白質(zhì)、肽類、同工酶等)生物組分的分離分析。
4.3.5 等速電泳
等速電泳(CITP)是一種“移動界面”電泳技術(shù)。是電泳中惟一的分離組分與電解質(zhì)一起向前移動,同時進(jìn)行分離的電泳方法。同等電聚焦電泳一樣,等速電泳在毛細(xì)管中的電滲流為零,它采用兩種不同濃度的電解質(zhì)組成,一種為前導(dǎo)電解質(zhì),充滿整個毛細(xì)管柱;另一種為尾隨電解質(zhì),置于一端的電泳槽中。圖6-3 是陰離子等速電泳示意圖。CITP 適用于小離子、小分子、肽類及蛋白質(zhì)的分離。
等速電泳特點(diǎn): 一是所有譜帶以同一速度移動。二是區(qū)帶銳化。三是區(qū)帶濃縮。
4.3.6 雙向凝膠電泳(二維電泳)
雙向凝膠電泳(two-dimensional gel electrophoresis, 2-DE)技術(shù)又稱二維凝膠電泳技術(shù),是目前常用的**一種能夠連續(xù)地在一塊膠上分離數(shù)千種蛋白質(zhì)的方法,**向采用等電聚集電泳。第二向采用了十二烷基硫酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳。廣泛應(yīng)用于生物學(xué)研究的各個領(lǐng)域,其原理是將高分辨率的等電聚集電泳和SDS-PAGE 電泳聯(lián)合組成雙向電泳。
4.3.7 免疫電泳
免役電泳是電泳分析與沉淀反應(yīng)的結(jié)合產(chǎn)物。該技術(shù)有兩大優(yōu)點(diǎn):一是加快了沉淀反應(yīng)的速度,二是將某些蛋白組分根據(jù)其帶電荷的不同而將其分開,再與抗體起反應(yīng),從而使本法更為微量化、多樣化。因此,其應(yīng)用范圍日益擴(kuò)大。
該方法可以用來研究:①抗原和抗體的相對應(yīng)性;②測定樣品的各成分以及它們的電泳遷移率;
③根據(jù)蛋白質(zhì)的電泳遷移率,免疫特性及其他特性,可以確定該復(fù)合物中含有某種蛋白質(zhì);④鑒定抗原或抗體的純度。

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