用途及適用范圍
本產(chǎn)品與
電泳儀組成等電聚焦電泳分析裝置。等電聚焦是利用載體兩性電解質(zhì)在外加電場的作用下，形成穩(wěn)定的 PH 梯度，使得蛋白質(zhì)，酶及多肽按其各自不同的等電點聚焦在相應(yīng)的 PH 位置上，達(dá)到分離的手段。薄層等電聚焦分析電泳可以在一塊薄層膠片上分析多個樣品。
主要結(jié)構(gòu)
主要由上蓋、電級架、冷卻板、制膠隔條、電泳導(dǎo)線等組成。
規(guī)格與性能
1、凝膠板尺寸： 215mmχ90mmχ0.4mm。
2、電極采用耐電解腐蝕、耐高溫、純度≥99.95%的貴金屬、制造，具有良好的導(dǎo)電性能，并且便于清洗、維修和更換。
3、正常工作條件為：環(huán)境溫度 0℃～40℃；相對濕度≤80%；周圍無強(qiáng)烈振動；實驗臺應(yīng)平整。
4、
電泳槽可連續(xù)工作時間≥24h。
5、允許使用外接電源**大電壓為 1600V。
6、外型尺寸（L×W×H）335mm×150mm×75mm。
7、重量 2200g。
使用說明
電泳前，禁止將
電泳槽附帶電源導(dǎo)線連接到
電泳儀電源上。
制膠：
1、置凝膠溶液。
2、架制膠室。在一塊玻璃的兩邊各放一根制膠隔條，(或制膠方框)然后把另一塊玻璃放在上面，用夾子夾好兩塊玻璃板便制成了一個膠室。下端不需要密封。
3、灌膠。將膠室平放在平臺上，把配好的凝膠溶液吸入一只注射器中，直接灌入制好的膠室中。注意灌膠時膠室要從玻璃板的一側(cè)逐漸灌入，同時用手指彈擊膠室，以避免在灌入的凝膠溶液中產(chǎn)生氣泡。灌入的膠液在液體的張力作用下是不會泄漏的。這樣灌滿凝膠溶液的膠室在室溫條件下放置 2 小時，溶液即凝固成膠了。
4、保存。如果當(dāng)天就要進(jìn)行電泳，凝固的薄層膠片需在 4℃冰箱中放置 1 小時，然后取出使用。如果不是當(dāng)天使用，則可以把凝固的薄層膠片放入一個低溫的濕室環(huán)境內(nèi)保存。用
普通的大號培養(yǎng)皿，按其大小剪好兩張圓形濾紙片，滴上少許蒸餾水使之浸濕，貼在皿內(nèi)的上下表面，即成為一個簡易的濕室。這樣把薄層膠片放入其中，保存在 4℃冰箱內(nèi)，可
供數(shù)周之內(nèi)使用。
樣品的預(yù)處理
樣品的高鹽濃度影響載體兩性電解質(zhì) PH 梯度的形成，從而導(dǎo)致區(qū)帶的歪斜，對這樣的樣品需要事先透析除鹽。樣品的低鹽濃度不利于蛋白質(zhì)溶解，常用 1%甘氨酸或載體兩性電解質(zhì)為溶劑溶解這樣的蛋白質(zhì)樣品。某些蛋白質(zhì)在其等電點附近沉淀，可以在凝膠中加入尿素，無離子或兩性離子去垢劑來助溶。此外，樣品應(yīng)預(yù)先去除顆粒，以免它們停留在加樣處，造成拖尾現(xiàn)象。
樣品的施加
揭開部分膠框,用兩個小鋼鏟,旋轉(zhuǎn)另一個小鋼鏟,揭去上層的玻璃板。注意要小心的操作，避免薄層膠片脫離下層的玻璃板。
樣品直接加在薄層膠片上有許多種方式。一般是用一疊 8 層的擦鏡紙，剪成 0.4×0.5cm的小方塊，先貼在膠片上，再用微量注射器滴加一定量的樣品；亦可以把小塊直接浸入樣品溶液中，再貼在膠片上，這樣的加樣量大約為 10μl。加樣量一般按所分析樣品中蛋白質(zhì)的類型和數(shù)目而定。用考馬斯亮藍(lán)染色，一般可加蛋白質(zhì) 1—10μg；用酶活性染色，可依所顯示的酶的區(qū)帶的深淺程度來調(diào)整酶樣品的濃度。
電極液的施加
電極液采用 1MHaPO4 為陽極液，1MNaOH 為陰極液，以適應(yīng) PH3.5－10.0 范圍的載體兩性電解質(zhì)形成相應(yīng)的 PH 梯度。
用 3 片為一疊的.5mm 寬的 whatmanl#濾紙條來浸濕電極液，然后分正負(fù)極，貼加在薄層膠片的兩端。電極濾紙條要貼加得平行，以便使鉑金絲電極正好壓在它們的上面。
電泳的條件
把載有加好了樣品和電極濾紙條的薄層膠片放在電極架的下架上，蓋好上架，使得電極絲和電極濾紙條充分接觸，成為一體，接通正負(fù)電極，即可開始電泳。
這樣簡單的薄層等電聚焦電泳在 4℃冰箱中進(jìn)行，如需要也可在室溫下通冷卻水電泳。
一般所給的條件是：起始電壓為 60V，15 分鐘調(diào)** 120V，轉(zhuǎn)而恒流，每厘米膠片長度 0.8—1.0mA，約 1 小時左右，電壓便上升到 600—700V，維持 3—3.5 小時即可結(jié)束電泳。
PH 梯度的測定
把 1 ×7cm的薄層切下來，從正極端到負(fù)極端切分為 14 等份，每份加 0.4ml 重蒸水，攪碎后用微量電極在一般的酸度計上測定它們的 PH 值，依此數(shù)據(jù)描繪出 PH 曲線。
染色及保存
蛋白質(zhì)染色步驟如下：1、5%磺基水楊酸＋10%三氯醋酸（W／V）固定 1 小時；2、過脫色液 35%無水乙醇＋10%冰醋酸（W／V）45 分鐘；3、染色液 0.2%考馬斯亮藍(lán) R250
的脫色液溶液（W／V）染色 30 分鐘；4、置脫色液（同 2）中，37℃溫箱內(nèi)過夜。
小肽染色步驟如下：1、10%三氯醋酸固定過夜；2、染色液染色三小時，染色液的配制是 50ml 考馬斯亮藍(lán) G250 加 50ml21mol／LH2SO4,不斷搖動 3 小時，過濾，取 9ml 濾液
加 1ml10mol／LKOH，然后加 1.36ml100%三氯醋酸。3、用蒸餾水漂洗背景。
活性染色依特異的組織化學(xué)方法進(jìn)行。
染色后的膠片可放在 20%甘油中或放在溫室的環(huán)境中，在冰箱中保存，也可制成干片。
等電點的測定
測量染色后所分離的區(qū)帶距正極端的長度，按 PH 曲線找出其響應(yīng)的等電點來。
日常維護(hù)與保養(yǎng)
包裝后的產(chǎn)品貯存環(huán)境溫度應(yīng)在- 40℃～55℃、相對濕度不超過 93%、無腐蝕性氣體和通風(fēng)良好的室內(nèi)，時間 15 周以內(nèi)。
平時注意保持
電泳槽清潔。使用后要徹底清洗，可用海綿沾少許洗衣粉、洗滌劑清洗，再用無離子水沖洗干凈，放在無灰塵處晾干備用。
我廠生產(chǎn)的電泳儀電源規(guī)格型號較多，常規(guī)型號均可滿足本產(chǎn)品的配套。除 DYY-1C、DYY-7C 型外均可使用。
電泳儀的使用必須嚴(yán)格按其使用說明書操作。
本產(chǎn)品工作時應(yīng)與電泳儀分開一定距離，嚴(yán)禁放在電泳儀上使用。
注意事項
本產(chǎn)品主體及部分配件均為易碎品，包裝、運(yùn)輸、使用中均應(yīng)謹(jǐn)防——高處跌落、碰撞；槽體內(nèi)安裝的鉑絲電極易斷裂，使用中應(yīng)小心操作。
