1. 硝酸纖維素膜

硝酸纖維素膜是蛋白印跡**廣泛使用的轉(zhuǎn)移介質(zhì)，對(duì)蛋白有很強(qiáng)的結(jié)合能力，而且適用于各種顯色方法，包括同位素，化學(xué)發(fā)光（Luminol類）、常規(guī)顯色、染色和熒光顯色；背景低，信噪比高。NC膜的使用也很簡(jiǎn)便，比如不需要甲醛預(yù)處理，只要在無(wú)離子水面浸潤(rùn)排出膜內(nèi)氣泡，再在電泳緩沖液中平衡幾分鐘就可以了；比如NC膜很容易封閉，也不需要特別嚴(yán)謹(jǐn)?shù)那逑礂l件。轉(zhuǎn)移到NC膜上的蛋白在合適的條件下可以穩(wěn)定保存很長(zhǎng)時(shí)間，不過(guò)要注意的是純的硝纖膜在比較脆，又容易卷，操作要小心，不適合用于需要多次重復(fù)清洗的用途--因?yàn)榻?jīng)不起多次“折磨”。選擇硝纖膜時(shí)要注意的是選擇合適的孔徑，通常20KD以上的大分子蛋白用0.45um孔徑的膜，小于20KD的話建議選擇0.2um的，如果小于7KD的話**好選擇0.1um的膜。另外還要注意選擇純的NC膜--混有含醋酸纖維（CM）的NC膜結(jié)合力會(huì)有所降低。另外提醒一句：由于NC膜上結(jié)合的蛋白會(huì)因?yàn)橐恍┤ノ蹌┒淮?，因此在封閉時(shí)**好使用較溫和的Tween20，而且濃度不要超過(guò)0.3%（據(jù)說(shuō)0.05%效果**好）。一般而言，NC膜越純，其蛋白結(jié)合能力就越高，所以要增加WB的靈敏度和分辨率，提高所使用膜的純度是個(gè)可以考慮的選擇。如果NC膜攙雜一些醋化纖維素--這在前面已經(jīng)提到，會(huì)影響蛋白質(zhì)結(jié)合。Protran由于是純NC膜，比較脆，機(jī)械耐受力欠佳，需要小心操作，如果擔(dān)心自己“粗手粗腳”，那么就可以考慮一下Optitran或者Pall公司的以耐受力著稱的BioTrace NT Nitrocellulose Transfer Membrane。卷膜肯定是**實(shí)惠的選擇，只不過(guò)要自己動(dòng)手裁剪--切記，必須帶手套操作。

2. PVDF膜

與硝酸纖維素膜相比，PVDF膜在蛋白質(zhì)截留能力，機(jī)械強(qiáng)度和化學(xué)相容性上都更優(yōu)越的性能。市售硝酸纖維素膜的典型結(jié)合量是80-100μg/cm2,而PVDF膜結(jié)合量是100-200μg/cm2（而結(jié)合強(qiáng)度PVDF比硝纖膜強(qiáng)6倍?。?。但是PVDF膜**大的優(yōu)點(diǎn)不僅于此：更好的機(jī)械強(qiáng)度和化學(xué)耐受性使PVDF膜在各種染色應(yīng)用和多重免疫檢測(cè)中成為理想選擇；而且單個(gè)凝膠的泳道復(fù)本可用于多種目的，特別是需要做N端蛋白測(cè)序，在相當(dāng)“嚴(yán)酷”的清洗條件下，當(dāng)尼龍或者硝纖膜已經(jīng)降解的情況下PVDF膜依然保持本色，笑傲江湖。所以PVDF也是要做蛋白測(cè)序的**選擇。但不適合熒光。PVDF膜特別注意的是需要100%甲醇預(yù)處理（不超過(guò)15秒）再用緩沖液平衡，才能用，而且適用過(guò)程中萬(wàn)一干了也要同樣程序再處理（不過(guò)要真出現(xiàn)這種問(wèn)題也是自己欠扁，誰(shuí)要你不小心呢，轉(zhuǎn)膜前處理也就罷了，轉(zhuǎn)膜后再這樣處理可能會(huì)影響后繼的抗體識(shí)別呢）。PVDF膜同樣分0.45um和0.2um的，后者孔徑小，對(duì)小分子蛋白有較好的攔截吸附，背景可能會(huì)比前者稍高。

卷膜經(jīng)濟(jì)實(shí)惠，裁剪剩下的邊角料還可以用來(lái)做點(diǎn)雜交。再次強(qiáng)調(diào)的是，疏水PVDF膜在用前必須經(jīng)過(guò)50%或以上體積比的甲醇或者乙醇溶液處理幾分鐘，待膜變成半透明后用純水漂洗一下，轉(zhuǎn)入電泳緩沖液平衡才能用。