1. 待別離生物大分子的性質(zhì)：待別離生物大分子所帶的電荷、分子巨細(xì)和性質(zhì)都會(huì)對(duì)電泳有顯著影響。通常來說，子帶的電荷量越大、直徑越小、形狀越接近球形，則其電泳搬遷速度越快。 

    2. 緩沖液的性質(zhì)：緩沖液的pH值會(huì)影響待別離生物大分子的解離程度，從而對(duì)其帶電性質(zhì)發(fā)生影響，溶液pH值間隔其等電點(diǎn)愈遠(yuǎn)，其所帶凈電荷量就越大，電泳的速度也就越大，特別關(guān)于蛋白質(zhì)等兩性分子，緩沖液pH還會(huì)影響到其電泳方向，當(dāng)緩沖液pH大于蛋白質(zhì)分子的等電點(diǎn)，蛋白質(zhì)分子帶負(fù)電荷，其電泳的方向是指向正極。為了堅(jiān)持電泳進(jìn)程中待別離生物大分子的電荷以及緩沖液pH值的穩(wěn)定性，緩沖液通常要堅(jiān)持必定的離子強(qiáng)度，通常在0.02－0.2，離子強(qiáng)度過低，則緩沖能力差，但假如離子強(qiáng)度過高，會(huì)在待別離分子周圍構(gòu)成較強(qiáng)的帶相反電荷的離子分散層（即離子氛），因?yàn)殡x子氛與待別離分子的移動(dòng)方向相反，它們之間發(fā)生了靜電引力，因此導(dǎo)致電泳速度下降。另外緩沖液的粘度也會(huì)對(duì)電泳速度發(fā)生影響。 

    3. 電場(chǎng)強(qiáng)度：電場(chǎng)強(qiáng)度（V/cm）是每厘米的電位降，也稱電位梯度。電場(chǎng)強(qiáng)度越大，電泳速度越快。但增大電場(chǎng)強(qiáng)度會(huì)導(dǎo)致經(jīng)過介質(zhì)的電流強(qiáng)度增大，而構(gòu)成電泳進(jìn)程發(fā)生的熱量增大。電流在介質(zhì)中所做的功（W）為：W=I2.R.t式中：I為電流強(qiáng)度，R為電阻，t為電泳時(shí)刻。 

  電流所作的功絕大有些都轉(zhuǎn)換為熱，因此導(dǎo)致介質(zhì)溫度升高，這會(huì)構(gòu)成許多影響： 

1、 樣品和緩沖離子分散速度添加，導(dǎo)致樣品別離帶的加寬； 2、 發(fā)生對(duì)流，導(dǎo)致待別離物的混合； 3、 假如樣品對(duì)熱靈敏，會(huì)導(dǎo)致蛋白變性； 

4、 導(dǎo)致介質(zhì)粘度下降、電阻下降等等。電泳中發(fā)生的熱通常是由中心向外周發(fā)出的，所以介質(zhì)中心溫度通常要高于外周，特別是管狀電泳，由此導(dǎo)致中心有些介質(zhì)相關(guān)于外周有些粘度下降，摩擦系數(shù)減小，電泳搬遷速度增大，因?yàn)橹行挠行┑碾娪舅俣缺冗呺H快，所以電泳別離帶通常呈弓型。下降電流強(qiáng)度，能夠減小生熱，但會(huì)延長(zhǎng)電泳時(shí)刻，導(dǎo)致待別離生物大分子分散的添加而影響別離效果。所以電泳實(shí)驗(yàn)中要挑選恰當(dāng)?shù)碾妶?chǎng)強(qiáng)度，一同能夠恰當(dāng)冷卻下降溫度以取得較好的別離效果。 

    4. 電滲：液體在電場(chǎng)中，關(guān)于固體支撐介質(zhì)的相對(duì)移動(dòng)，稱為電滲景象。因?yàn)橹谓橘|(zhì)外表可能會(huì)存在一些帶電基團(tuán)，如濾紙外表通常有一些羧基，瓊脂可能會(huì)富含一些硫酸基，而玻璃外表通常有Si-OH基團(tuán)等等。這些基團(tuán)電離后會(huì)使支撐介質(zhì)外表帶電，吸附一些帶相反電荷的離子，在電場(chǎng)的效果下向電極方向移動(dòng)，構(gòu)成介質(zhì)外表溶液的活動(dòng)，這種景象即是電滲。在pH值高于3時(shí)，玻璃外表帶負(fù)電，吸附溶液中的正電離子，導(dǎo)致玻璃外表鄰近溶液層帶正電，在電場(chǎng)的效果下，向負(fù)極搬遷，股動(dòng)電極液發(fā)生向負(fù)極的電滲流。假如電滲方向與待別離分子電泳方向一樣，則加速電泳速度；假如相反，則下降電泳速度。 

5. 支撐介質(zhì)的篩孔：支撐介質(zhì)的篩孔巨細(xì)對(duì)待別離生物大分子的電泳搬遷速度有顯著的影響。在篩孔大的介質(zhì)中泳動(dòng)速度快，反之，則泳動(dòng)速度慢。  

關(guān)于膠收回切膠的一點(diǎn)注意事項(xiàng)： 

1. 電泳的buffer和gel都是新制的，切膠的臺(tái)子整理潔凈，刀片**佳洗凈滅菌，總歸一句話即是確保切下的帶沒有外源dna污染。 

2. 切膠是要把全部意圖片斷所在方位的膠全部收回。為了削減膠的體積，能夠用相對(duì)比較薄的膠來做，只要夠點(diǎn)樣即可，也可采用薄而寬的梳子來跑膠。 3. 關(guān)于防護(hù)，在通常有機(jī)玻璃后就足夠了，戴上防護(hù)面具以維護(hù)雙眼，假如戴樹脂眼鏡就能夠了。要是十分懼怕紫外照射，或許關(guān)于膠有特殊請(qǐng)求，例如請(qǐng)求不含EB，能夠采用點(diǎn)marker和帶刻度的尺子一同照相的方法來斷定意圖條帶在膠上的方位進(jìn)行切膠。 

4. 依照正常程序點(diǎn)marker跑膠，然后切下有marker的膠，EB染色，紫外燈下與帶刻度的尺子一同照相。因?yàn)橐栈氐膸cmarker間的相對(duì)方位已知，依據(jù)尺子來衡量未染色膠上意圖帶的方位即可。假如覺得很難判別，能夠直接在marker邊點(diǎn)少數(shù)的樣，這么方位就簡(jiǎn)單斷定了。