【材料與試劑】

（1）         轉(zhuǎn)印緩沖液

    Tris堿        48mmol/L             5.8g

    甘氨酸        39mmol/L             2.9g

    SDS           0.037% (w/v)          0.37g

    甲醇           20%                  200ml

    蒸餾水                         加**1000ml

（2）甲醇

（3）6張吸水紙（Whtaman 3 MM或類(lèi)似物）和1張PVDF膜

（4）電轉(zhuǎn)移裝置

【操作步驟】

（1）用蒸餾水淋洗裝置的平板電極；

（2）將凝膠切成適當(dāng)大小用于轉(zhuǎn)印。除去無(wú)關(guān)的凝膠和未使用的泳道。作好凝膠標(biāo)記以確定**條泳道的方向。在準(zhǔn)備濾紙時(shí)，將凝膠放入轉(zhuǎn)印緩沖液中；

（3）剪取6張吸水紙（Whtaman 3 MM或替代物）和1張PVDF膜，使其稍大于凝膠，將PVDF膜浸泡在甲醇溶液中5分鐘，操作時(shí)要戴手套。油污或其它蛋白質(zhì)可阻礙蛋白質(zhì)與PVDF膜結(jié)合。濾紙剪成適當(dāng)大小。如果濾紙與凝膠的邊緣重疊，電流將短路而繞過(guò)凝膠，使轉(zhuǎn)印不能有效進(jìn)行。一個(gè)可行的辦法是以封口膜作為墊子繞在凝膠的周?chē)鷮⑵渑c濾紙分開(kāi)或膜的面積稍大于凝膠，使凝膠通過(guò)膜與濾紙分開(kāi)；

（4）將吸水紙放入轉(zhuǎn)印緩沖液中浸濕；

（5）將凝膠、PVDF膜和濾紙放在平板裝置的底部，放置順序如下：

-底部平板陽(yáng)極

a.三層轉(zhuǎn)印緩沖液浸濕的吸水紙

b.一張轉(zhuǎn)印緩沖液浸濕的PVDF膜

c.用轉(zhuǎn)印緩沖液稍微濕潤(rùn)的聚丙烯酰胺凝膠

d.三層轉(zhuǎn)印緩沖液浸濕的吸水紙

-陰極

（6）仔細(xì)檢查有無(wú)氣泡，并用戴有手套的手或玻棒驅(qū)趕氣泡，吸干凝膠-濾紙夾層組合旁邊的緩沖液。許多裝置在凝膠-濾紙夾層組合旁邊有一個(gè)墊圈以防轉(zhuǎn)印時(shí)發(fā)生短路；

（7）小心將電極插入裝置頂部。接通電極（正極或紅色表示陽(yáng)極）并進(jìn)行轉(zhuǎn)印。以0.8mA/cm2 凝膠，轉(zhuǎn)印45min**1.5h。轉(zhuǎn)印時(shí)間不宜太長(zhǎng)，否則易引起干膠；

（8）轉(zhuǎn)印結(jié)束后立即斷開(kāi)電源，小心拆開(kāi)裝置，將膜做上標(biāo)記。電極用后要用蒸餾水清洗。