Bcl-2原癌基因被認(rèn)為是哺乳動(dòng)物細(xì)胞凋亡過程中的負(fù)調(diào)控劑。本法采用鼠抗Bcl-2單克隆抗體，可通過免疫組化或免疫細(xì)胞化學(xué)的方法用于檢測組織或細(xì)胞中的Bcl-2，或者通過Western blots檢測細(xì)胞粗提物。
樣本來源
1. 離心細(xì)胞；
2. 細(xì)胞涂片、冰凍或石蠟包埋組織切片；
3. 細(xì)胞粗提物。
材料與試劑
1. 鼠抗Bcl-2單克隆抗體；
2. 堿性磷酸酶－抗堿性磷酸酶（APAAP）；
3. PBS緩沖液
操作步驟
1. 標(biāo)本固定：用丙酮或甲醇將標(biāo)本（冰凍組織切片或新鮮組織涂片）固定于玻片上，－20℃，10分鐘；
2. 抗Bcl-2抗體（1：40～1：80）室溫孵育1小時(shí)；
3. PBS洗三次；
4. 用抗鼠抗體（橋聯(lián)抗體）室溫孵育1小時(shí)；
5. PBS洗三次；
6. 在APAAP溶液中孵育，室溫30分鐘；
7. PBS洗三次；
8. 加入Fast Red 底物直到出現(xiàn)明顯的紅色；
9. 以蘇木素復(fù)染、封片、觀察結(jié)果；
結(jié)果判斷
Bcl-2蛋白顯紅色。
注意事項(xiàng)
Western blot方法中抗Bcl-2抗體與26KD的Bcl-2原癌基因產(chǎn)物結(jié)合。在離心細(xì)胞、細(xì)胞涂片、冰凍組織切片，抗體可與Bcl-2蛋白中的41－54位氨基酸結(jié)合。在常規(guī)固定的石蠟包埋組織切片中，由于抗原表位被封閉，因此抗體僅與較少量細(xì)胞反應(yīng)。
